基于二维高效液相色谱法测定两性霉素B血药浓度

目的 基于二维高效液相色谱法建立两性霉素B血药浓度的测定方法.方法 第一维色谱柱采用Aston SX1色谱柱(3.5 mm×25.0 mm,5.0 μm),流动相 V甲醇∶V乙腈∶V水(25.0 mmoL/L磷酸铵盐水溶液)=1∶3∶3,流速0.7 mL/min;第二维色谱柱采用Aston SCB色谱柱(4.6 mm×125.0 mm,5.0μm),流动相V水(25.0 mmol/L磷酸铵盐水溶液):V水(1.0 mmol/L磷酸氢二铵溶液)∶V甲醇∶V乙腈=10∶35∶10∶ 45,流速1.0 mL/min;中间柱采用Aston SCB色谱柱(4.6 mm×10.0 mm,3.5 μm),辅助流动相为纯水.检测波长380 nm,柱温40℃,进样体积300μL.结果 两性霉素B在0.059～12.31μg/mL与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),最低定量限为0.04 μg/mL,检测限为0.01 μg/mL,方法回收率为98.79％～99.39％,提取回收率为98.50％～99.00％,日内精密度、日间精密度的相对标准偏差(RSD)均小于3.00％.结论 基于二维高效液相色谱法的两性霉素B血药浓度测定法具有灵敏度高、重现性好、自动化程度高、样品处理简单等特点,符合血清样品的检测要求,可应用于临床患者的两性霉素B血药浓度监测.