"通督调神"电针预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质PPARγ介导的细胞焦亡的影响

目的:观察"通督调神"电针预处理对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠脑皮质过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)介导的细胞焦亡的影响,探讨电针防治CIRI的可能机制.方法:将110只清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、电针+抑制剂组和激动剂组,每组22只.电针组大鼠于造模前予电针"百会""风府""大椎"干预,疏密波,频率2 Hz/5 Hz,电流强度1～2 mA,每次20 min,每天1次,连续干预7 d;在电针组基础上,第7 天予电针+抑制剂组大鼠腹腔注射PPARγ抑制剂GW9662(10 mg/kg).激动剂组大鼠第7 天予腹腔注射 PPARγ激动剂盐酸吡格列酮(10 mg/kg).干预结束后,除假手术组外,其他各组大鼠采用改良线栓法制备右侧CIRI模型.采用改良神经功能损伤评分(mNSS)评定大鼠神经行为学情况,TTC染色检测大鼠相对脑梗死体积,TUNEL染色检测大鼠脑皮质神经细胞凋亡,透射电镜观察大鼠脑皮质神经细胞焦亡,免疫荧光法检测大鼠脑皮质PPARγ、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)阳性表达,Western blot法检测大鼠脑皮质PPARγ、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)、焦孔素-D(GSDMD)、GSDMD-N末端(GSDMD-N)蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测大鼠脑皮质PPARγ、NLRP3、caspase-1、GSDMD mRNA表达,ELISA法检测大鼠脑皮质白介素(IL)-1β、IL-18含量.结果:与假手术组比较,模型组大鼠mNSS、相对脑梗死体积、TUNEL 阳性细胞率升高(P＜0.01),细胞焦亡情况严重,PPARγ、NLRP3、caspase-1、GSDMD 蛋白及mRNA表达升高(P＜0.01),GSDMD-N蛋白表达及IL-1β、IL-18含量升高(P＜0.01).与模型组比较,电针组、激动剂组mNSS、相对脑梗死体积、TUNEL阳性细胞率降低(P＜0.01),细胞焦亡情况减轻,PPARγ蛋白及mRNA表达升高(P＜0.01),NLRP3、caspase-1、GSDMD蛋白及mRNA表达降低(P＜0.01),GSDMD-N蛋白表达降低(P＜0.01),IL-1β、IL-18含量降低(P＜0.01);电针+抑制剂组PPARγ蛋白表达升高(P＜0.01),NLRP3、GSDMD蛋白及mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),caspase-1 mRNA表达降低(P＜0.01),IL-1β、IL-18含量降低(P＜0.01).与电针+抑制剂组比较,电针组mNSS、相对脑梗死体积、TUNEL阳性细胞率降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞焦亡情况减轻,PPARγ蛋白及mRNA表达升高(P＜0.01),NLRP3、caspase-1、GSDMD 蛋白及mRNA表达降低(P＜0.01),GSDMD-N 蛋白表达降低(P＜0.01),IL-1β、IL-18 含量降低(P＜0.01).与激动剂组比较,电针组相对脑梗死体积、TUNEL阳性细胞率升高(P＜0.05,P＜0.01),PPARγ mRNA表达降低(P＜0.01),GSDMD-N 蛋白表达升高(P＜0.05),IL-1β、IL-18 含量升高(P＜0.01).结论:"通督调神"电针预处理可减轻 CIRI 大鼠神经功能损伤,其机制可能与上调大鼠脑皮质PPARγ表达,进而抑制 NLRP3 表达,影响细胞焦亡有关.