基于JAK2/STAT3信号通路探讨三棱-莪术含药血清对人异位子宫内膜间质细胞增殖、凋亡和迁移的影响

基于酪氨酸蛋白激酶(Janus kinase,JAK)2/信号传导及转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)3 信号通路,研究三棱-莪术含药血清对异位的子宫内膜间质细胞(ectopic endometrial stromal cells,ESCs)增殖、凋亡、迁移和炎症因子分泌的影响.原代培养ESCs,噻唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测不同质量分数(5％、10％、20％)三棱、莪术、两药配伍的含药血清和AG490 溶液(50 μmol·L-1)对ESCs增殖的影响,并由此选择最优剂量用于后续实验;将细胞分为空白血清组、三棱组(10％)、莪术组(10％)、配伍组(10％)和AG490 组,以流式细胞术检测ESCs凋亡水平,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α分泌水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase)-3、B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma,Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 as-sociated X protein,Bax)的蛋白表达以及JAK2、STAT3 蛋白的磷酸化水平.结果显示,与空白血清组相比,各给药组均能使ESCs的活力显著降低(P＜0.01),尤其 10％含药血清细胞活力低于其他组,因此后续实验采用 10％的含药血清进行观察.10％的三棱、莪术和两药配伍的含药血清均能使细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),细胞中caspase-3和Bax蛋白表达均显著升高(P＜0.05 或P＜0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.01),细胞迁移率显著降低(P＜0.05 或P＜0.01),细胞分泌的IL-1β、IL-6和TNF-α显著减少(P＜0.05 或P＜0.01),JAK2 和STAT3 的磷酸化水平显著降低(P＜0.05 或P＜0.01).与三棱、莪术组相比,10％配伍组含药血清孵育后细胞活力更低(P＜0.01),caspase-3 和Bax蛋白表达较高(P＜0.05 或P＜0.01),Bcl-2 蛋白表达更低(P＜0.05),JAK2 蛋白磷酸化程度较低(P＜0.05).10％配伍组含药血清孵育后,细胞凋亡率明显高于莪术组(P＜0.05),细胞的迁移率明显低于莪术组(P＜0.01),对STAT3 蛋白磷酸化的抑制作用明显强于三棱组(P＜0.05).三棱、莪术及其配伍应用改善子宫内膜异位症的作用机制可能与阻断JAK2/STAT3 信号通路,抑制ESCs增殖,促进细胞凋亡,减弱其迁移能力,减少炎症因子的分泌有关,并且三棱-莪术等比配伍效果优于两药单用.