脓毒症患者循环外泌体对T细胞功能的影响

目的:探讨脓毒症患者循环外泌体（EXO）对T细胞功能的影响。方法:用超速离心法获取南方医科大学附属广东省人民医院急诊重症监护室收治的10例脓毒症患者血浆EXO后，利用透射电镜观察、纳米粒子跟踪分析（NTA）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测EXO标志物鉴定EXO的特征。从5名健康志愿者外周血中分离出外周血单个核细胞（PBMC），使用磁珠分选原代T细胞并体外扩增。用不同剂量（0、1、2.5、5、10 mg/L）脓毒症患者循环EXO干预T细胞24 h后，使用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测T细胞活性，流式细胞术检测T细胞活化指标CD69和CD25的表达，进一步评估CD4 + T细胞程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）表达和调节性T细胞（Treg）比例等免疫抑制指标。 结果:鉴定结果证实成功从脓毒症患者血浆中提取出EXO，脓毒症患者循环EXO含量明显高于健康对照组（mg/L：48.78±5.14比22.18±2.25， P<0.01）。5 mg/L脓毒症患者血浆EXO干预原代T细胞24 h后，T细胞活性开始出现抑制〔（85.84±0.56）%比（100.00±0.00）%， P<0.05〕；随着剂量增加，10 mg/L EXO干预T细胞24 h后，细胞活性被明显抑制〔（72.44±2.36）%比（100.00±0.00）%， P<0.01〕。与健康对照组相比，脓毒症患者血浆EXO干预T细胞后，早期活化指标CD69表达显著减少〔（52.87±1.29）%比（67.13±3.56）%， P<0.05〕，同时伴随着T细胞中PD-1表达上调〔（57.73±3.06）%比（32.07±0.22）%， P<0.01〕和Treg比例增加〔（54.67±1.19）%比（24.60±3.51）%， P<0.01〕，但晚期活化指标CD25表达保持稳定〔（84.77±3.44）%比（85.93±2.32）%， P>0.05〕。 结论:脓毒症患者循环EXO引起T细胞功能障碍，其可能是导致脓毒症免疫抑制的新机制。