水果及环境水样中苯醚甲环唑的高灵敏免疫分析方法研究

采用辣根过氧化物酶(HRP)催化氧化四甲基联苯胺(TMB)显色为信号输出系统,结合间接竞争反应模式建立了水果及环境水样中苯醚甲环唑的间接竞争酶联免疫分析方法(ic ELISA).基于高特异性单克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件为:包被原与抗体质量浓度组合为62.5 ng/mL和0.318 μg/mL,一抗竞争反应缓冲溶液为含0.05％Tween-20的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBST,pH 7.4),一抗竞争反应时间为20 min,酶标二抗稀释液为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4),酶标二抗反应时间为30 min.在该条件下,苯醚甲环唑的线性检测范围(IC20～IC80)为0.49～3.90 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为1.38 ng/mL,检出限(LOD)为0.33 ng/mL.在柑橘、葡萄、香蕉、草莓田水、湖水和河水样品中的平均加标回收率为72.3％～132％,相对标准偏差(RSD)不大于13％,对10种结构和功能类似物的交叉反应率(CR)均小于0.2％.该方法准确可靠,可用于水果及环境水样中苯醚甲环唑的快速筛查和残留检测.