宽叶山蒿与艾饮片及其叶绒的特异性PCR鉴别

宽叶山蒿为艾的近源种,两者饮片或叶绒混在一起很难鉴别.该研究旨在从分子层面建立一种快速鉴别宽叶山蒿与艾的方法.根据宽叶山蒿与艾的ITS2 基因测序结果,使用DNAMAN软件进行序列比对,分析得到在ITS2 基因 202 位存在C/T单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP);并依据此SNP位点设计特异性引物,建立并优化特异性PCR方法,以此方法进行混样检测验证可行性与稳定性.在特异性PCR条件下,使用特异性引物JNC-F与通用引物ITS3R,艾可以扩增出 1 条 218 bp的特异条带,而宽叶山蒿不能扩增;使用特异性引物KY-F与通用引物ITS3R,宽叶山蒿可以扩增出 218 bp特异条带,而艾不能扩增.建立的方法同时可以用于检测饮片及加工品叶绒,使用JNC-F/ITS3R体系可以检测宽叶山蒿中是否混有艾,艾饮片及叶绒的最低检测限均为 3%;使用KY-F/ITS3R体系可以检测艾中是否混有宽叶山蒿,宽叶山蒿饮片及叶绒的最低检测限均为 5%.模板检出限考察中 2 个体系对模板的检出限均为 5 ng.构建方法可为两者质量控制提供依据,准确检测和判定市场上 2 种药材是否混用.