稳定低表达乳酸脱氢酶A对HepG2和ZR⁃75⁃1细胞糖代谢、增殖和迁移的影响

目的 通过构建乳酸脱氢酶A(LDHA)稳定低表达的HepG2和ZR-75-1细胞系,观察LDHA表达降低对肝癌细胞HepG2和乳腺癌细胞ZR-75-1糖代谢、增殖、迁移的影响.方法 采用慢病毒介导的LDHA-shRNA载体,将新构建质粒转染至HEK293T细胞中检测抑制效果,实时定量PCR检测LDHA mRNA水平,Western印迹检测蛋白水平.对经嘌呤霉素筛选后感染慢病毒的稳定低表达LDHA的HepG2和ZR-75-1细胞进行功能测定,利用糖代谢相关试剂盒检测敲低后肿瘤细胞中糖摄取、三磷酸腺苷(ATP)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸水平;利用生长曲线实验和克隆形成实验检测LDHA基因表达降低对细胞增殖的影响;利用划痕实验检测LDHA表达降低对细胞迁移能力的影响.结果 实时定量PCR及Western印迹结果显示,LDHA表达在mRNA水平及蛋白水平上均受到了抑制;糖代谢相关试剂盒检测结果表明稳定低表达LDHA的肿瘤细胞中糖摄取、ATP水平、LDH和乳酸水平均明显下降;生长曲线实验(CCK-8法)和克隆形成实验显示,慢病毒介导的LDHA shRNA能明显抑制肿瘤细胞的增殖;划痕实验显示,敲低LDHA后HepG2和ZR-75-1细胞迁移能力受到了明显抑制.结论 LDHA表达降低可明显抑制肿瘤细胞中糖摄取、ATP、LDH和乳酸水平并且抑制肿瘤细胞的增殖和迁移.