淫羊藿苷改善甲状腺功能减退模型大鼠的垂体发育

背景:甲状腺功能减退常伴随着垂体合成分泌激素分泌不足,有研究表明淫羊藿苷对甲状腺功能减退引起的垂体激素分泌不足有确切疗效,但其作用机制还不清楚.目的:探究淫羊藿苷对大鼠甲状腺功能减退后垂体合成分泌激素的影响及机制.方法:①40只新生雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组及75,150,300 mg/kg淫羊藿苷组,每组8只,后4组给予丙基硫氧嘧啶1.5 mg/(kg·d)灌胃处理构建甲状腺功能减退大鼠模型,各淫羊藿苷剂量组给予75,150,300 mg/kg淫羊藿苷干预治疗,检测各组miR-17-5p、LIM同源框4(LIM homeobox 4,LHX4)、PROP成对同源1蛋白(prop paired end homology 1 protein,PROP1)和HESX1表达,以及垂体合成分泌激素含量.②采用锂盐处理共培养的大鼠甲状腺细胞和垂体前叶细胞,给予不同浓度淫羊藿苷(10,30,50,70,100μmol/L)干预,CCK-8试剂盒检测垂体前叶细胞活力;ELISA试剂盒检测促卵泡激素、生长激素和促甲状腺激素水平;实时荧光定量PCR检测miR-17-5p表达;Western印迹法检测PROP1和HESX1蛋白水平;采用双荧光素报告酶基因和RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测miR-17-5p和LHX4的结合关系.结果 与结论:①体内实验结果显示,150 mg/kg淫羊藿苷组较模型组促甲状腺激素含量降低(P<0.05),生长激素(P<0.01)和促卵泡激素(P<0.05)含量显著升高;此外,150 mg/kg淫羊藿苷组较模型组血清游离三碘甲状腺原氨酸、血清游离甲状腺素、血清三碘甲状腺原氨酸和血清甲状腺素激素分泌水平增加;②用50,70,100μmol/L淫羊藿苷干预能够增强大鼠垂体前叶细胞活力(P<0.01),其中70μmol/L淫羊藿苷干预效果最佳(P均<0.01);③淫羊藿苷处理抑制了锂盐处理的大鼠垂体前叶细胞中miR-17-5p表达增加,上调PROP1和HESX1表达(P均<0.05);④锂盐处理组细胞上清液中生长激素和促卵泡激素含量明显降低,促甲状腺激素含量增加,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01);⑤用不同浓度淫羊藿苷干预细胞后,生长激素和促卵泡激素含量增加(P<0.01),促甲状腺激素水平明显降低(P<0.05),70μmol/L时干预效果最佳(P<0.01);⑥与对照组相比,转染miR-17-5p mimic抑制锂盐处理的大鼠垂体前叶细胞活力(P<0.05),下调细胞中PROP1和HESX1的蛋白表达,增加促甲状腺激素含量(P<0.05),减少生长激素和促卵泡激素含量(P均<0.01),而转染miR-17-5p inhibitor与转染miR-17-5p mimic的作用相反;⑦LHX4是miR-17-5p的靶基因,过表达LHX4增加细胞活力,促进PROP1和HESX1蛋白表达(P均<0.01),减少促甲状腺激素含量(P<0.05),增加生长激素和促卵泡激素含量(P<0.01);⑧提示淫羊藿苷可能通过miR-17-5p/LHX4轴恢复失调的垂体合成分泌激素水平.