建立体外H2O2诱导神经元衰老的模型

背景:衰老导致神经元形态缺失及功能下降,从而成为引发神经退行性疾病最重要的危险因素.目前对神经元衰老机制的研究尚不完善,体外衰老模型的建立将促进研究进展.背根神经节作为少数成熟的哺乳动物神经元,具有易于分离进行体外培养的优点,因此成为建立体外衰老模型的合适目标.目的:探索合适的诱导神经元衰老的条件,建立体外H2O2诱导神经元衰老的模型.方法:从1月龄的ICR小鼠体内获取背根神经节进行体外培养,分别加入10,20,50μmol/L的H2O2刺激细胞1 h和2 h.通过检测β-半乳糖苷酶的活性及神经元的细胞存活率,筛选诱导细胞衰老的合适条件.然后通过检测该诱导条件下自噬相关蛋白SQSTM1/p62的表达水平、活性氧的水平以及神经元的轴突生长能力,来进一步验证该条件可成功诱导神经元衰老,从而成功建立神经元的体外衰老模型.结果 与结论:①通过检测β-半乳糖苷酶活性及神经元的存活率筛选出10μmol/L-2 h可作为合适的诱导条件;②10μmol/L-2 h的条件可使自噬受体SQSTM1/p62的表达量下降(P<0.01),符合细胞衰老的特征;③10μmol/L-2 h的条件下,活性氧的产生明显增加(P<0.01),表明线粒体功能受损,细胞衰老;④10μmol/L-2 h的条件下,神经元轴突生长能力明显变弱(P<0.001),符合神经元衰老的特征;⑤结果说明,10μmol/L-2 h的H2O2可成功用于神经元体外衰老模型的建立.