基于eDNA技术富集水体中急性肝胰腺坏死病副溶血性弧菌的初步研究

环境DNA(Environmental DNA,eDNA)的丰度往往较低,不容易被检测到.为加强养殖海水中急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,VpAHPND)的监测,对疫病进行早期预警,需要对大容量的水体进行富集.采用滤膜法浓缩水体,探究不同体积养殖海水、不同材质不同孔径的滤膜、不同核酸抽提试剂盒,对水体中VpAHPND富集效果的影响.结果表明,采集500 mL养殖海水,用0.45μm硝酸纤维素膜富集水体,经过天根海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取滤膜核酸,荧光定量PCR结果显示富集后的水体中VpAHPND的拷贝数放大了1000倍以上.同时,采用滤膜法对17批进口亲虾携带水和13批广东湛江凡纳滨对虾虾苗养殖海水进行eDNA检测,从虾苗场检出3批VpAHPND阳性,经富集后水体中eDNA检测结果与虾苗组织检测结果一致.因此,基于0.45μm硝酸纤维素膜的滤膜法可以高效富集水体的VpAHPND.该研究结果可为进口亲虾携带水、对虾养殖海水等环境水中VpAHPND疫病预警、科学监测、风险评估等提供全新的快速、可靠、高效的监测方法.