肝糖异方改善肝细胞过氧化损伤致糖代谢异常的体外研究

目的 探讨肝糖异方改善氧化应激、通过调控糖原合成信号通路糖原合成激酶-3β(GSK-3β)/FoxO1转录因子(FoxO1)调节糖代谢的作用机制.方法 肝细胞以500μmol/L过氧化氢(H2O2)孵育30 min后分为模型组、肝糖异方组及二甲双胍组,肝糖异方组及二甲双胍组分别以肝糖异方(200μg/L)及二甲双胍(5 mmol/L)与肝细胞共孵育48 h,同时设正常组以对照.采用CCK-8法检测细胞活力;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性及丙二醛(MDA)水平;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;过碘酸雪夫染色(PAS)法检测肝细胞内糖原含量;葡萄糖氧化酶法检测细胞上清中葡萄糖浓度;Western blot法检测细胞p-GSK-3β/GSK-3β、p-FoxO1/FoxO1蛋白表达.结果 与正常组比较,H2O2可诱导模型组肝细胞过氧化损伤,且细胞上清中ALT、AST活性及MDA含量明显升高(P<0.05),ROS生成速率明显升高(P<0.05),细胞上清中葡萄糖含量明显升高(P<0.05),糖原染色结果显示糖原阳染颗粒显著减少、细胞着色较浅,p-GSK-3β/GSK-3β及p-FoxO1/FoxO1蛋白表达明显降低(P<0.05).与模型组比较,肝糖异方及二甲双胍干预后,ALT、AST、MDA水平均有不同程度的降低,ROS生成速率均明显降低(P<0.05),且肝糖异方均优于二甲双胍(P<0.05);肝糖异方组细胞着色较模型组加深,细胞上清中葡萄糖含量显著下降(P<0.05),p-GSK-3β/GSK-3β及p-FoxO1/FoxO1蛋白表达升高(P<0.05).结论 肝糖异方可减轻H2O2诱导的肝细胞氧化应激损伤致糖代谢异常,其作用机制与激活GSK-3β/FoxO1糖原合成信号通路有关.