三种组织透明化方法在神经科学应用中的比较

目的 选择三种较常见的组织透明化方法,即PACT、MACS和 Visikol,比较其在脑组织不同抗原类型和不同标记方案中的兼容性,为检测特定靶蛋白的最适组织透明化方案提供参考.方法 分别利用转基因小鼠来源的内源性荧光、小分子荧光标记物标记特定蛋白、免疫荧光化学标记特定靶抗原等方法进行脑组织样本的标记;采用基于水凝胶包埋的PACT方法、基于尿素透明化技术改进的MACS方法和基于溶剂透明技术的Visikol HISTO商品化试剂三种方案对上述标记的脑组织样本分别进行透明化处理;利用共聚焦显微镜,选择适配于以上三种透明化方案样本折射率的物镜进行成像.结果 以厚脑片(150 μm)为研究对象,三种方法达到组织透明效果所需的时间PACT法最长,Visikol法次之,MACS法最短.对于不同内源性荧光蛋白,PACT和MACS法能较好保存抗原荧光,而Visikol法处理后荧光淬灭严重;对于以血管凝集素为例的小分子荧光标记物,三种方法均可完成标记,但Visikol法效果最好.对于胞核与胞质抗原分别进行免疫荧光化学染色,三种方法均可完成标记;而对于胞膜抗原进行免疫荧光化学染色,PACT和MACS法能较好实现标记.结论 由于抗原类型的特点和透明化原理的不同,组织成像效果并不完全相同.选择合适的抗原标记方案结合特定的组织透明化方法对于成功实现一定空间范围内的三维组织成像至关重要.