靶向TRAIL死亡受体DR5降低胃肠道间质瘤细胞抗失巢凋亡及免疫抑制因子分泌水平的研究

目的 探讨靶向肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)死亡受体5(DR5)对胃肠道间质瘤(GIST)细胞失巢凋亡及分泌免疫抑制因子的影响.方法 收集2021-09-01-2022-02-16于石河子大学第一附属医院行手术切除治疗的38例GIST患者的肿瘤组织及癌旁组织.免疫组化染色检测组织中TRAIL与DR5蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)测定组织内TRAIL与DR5 mRNA表达水平.将人GIST细胞系GIST-T1随机分为对照组、sh-NC组和sh-DR5组,采用脂质体介导法分别将sh-NC、sh-DR5重组质粒转染至对应组细胞中,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测转染效果.收集转染后GIST-T1细胞培养液上清,酶联免疫吸附法测定上清中血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素6(IL-6)及IL-8水平,软琼脂集落形成实验检测转染后GIST-T1细胞的集落形成情况.利用多聚2-羟乙基甲基丙烯酸酯(Poly-HEMA)悬浮培养GIST-T1细胞以诱导建立失巢凋亡模型,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Calcein AM/EthD-1荧光双染鉴别各组细胞中活细胞和死细胞.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 与对照组癌旁组织比较,GIST组织中TRAIL表达降低而DR5表达升高,相对表达量分别为0.34±0.03和1.95±0.17,差异有统计学意义,t值分别为26.517和19.886,均P＜0.001.相较于对照组与sh-NC组,sh-DR5组GIST-T1细胞中DR5 mRNA与蛋白相对表达量均下调,分别为0.24±0.01和0.17±0.01,差异有统计学意义,F值分别为32.567和50.124,均P＜0.001.与对照组和sh-NC组比较,sh-DR5组GIST-T1细胞上清中VEGF、TGF-β1、IL-6及IL-8水平均下降(均P＜0.05),细胞集落形成个数减少、集落变小,经Poly-HEMA悬浮培养的细胞团块较为分散、直径变小,细胞凋亡率增加至(33.63±3.19)％,差异有统计学意义,F=87.025,P＜0.001;EthD-1标记的失巢凋亡细胞比例也增加至(42.58±4.15)％,差异有统计学意义,F=86.165,P＜0.001.结论 在GIST组织中TRAIL表达降低而DR5表达升高,靶向DR5能够促进GIST-T1失巢凋亡,并降低免疫抑制因子的分泌水平,从而发挥抗肿瘤作用.