生长因子受体结合蛋白2接头蛋白2缺失促进下肢动脉血管内皮细胞自噬的机制

目的 观察缺氧通过抑制血管内皮细胞生长因子受体结合蛋白2接头蛋白2(GAB2)的表达,导致下肢动脉内皮损伤的分子机制.方法 血管标本取材于上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科,粥样硬化股动脉标本取自于下肢动脉粥样硬化闭塞(ASO)截肢患者,正常动脉血管取自于意外车祸截肢患者.通过组织免疫荧光(IF)、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测正常动脉血管与ASO病变动脉血管内膜组织中GAB2表达差异.采用RT-qPCR和Western blot检测缺氧条件下内皮细胞中微小RNA(miR)-30a及GAB2表达改变.内皮细胞中沉默或过表达GAB2后Westernblot检测自噬标志物LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达.组间比较采用t检验.结果 组织免疫荧光(IF)和Western blot检测显示内皮细胞自噬水平ASO组织高于正常组织(5.252±0.449,t=15.950,P＜0.01;1.805±0.210,t=5.471,P＜0.01),同时 GAB2 表达 ASO 组织低于正常组织(0.349±0.028,t=32.120,P＜0.01;0.399±0.059,t=5.180,P＜0.01);体外实验显示内皮细胞中GAB2表达缺氧组低于对照组(0.668±0.088,t=3.774,P＜0.01);内皮细胞自噬标志物LC3 Ⅱ/Ⅰ水平沉默GAB2组高于对照组(1.197±0.036,t=9.376,P＜0.01).进一步机制研究结果显示,内皮细胞中miR-30a表达量缺氧组高于对照组(2.349±0.118,t=9.257,P＜0.01),GAB2 mRNA 水平过表达 miR-30a 组低于对照组(0.207±0.040,t=6.031,P＜0.01).结论 缺氧促进血管内皮细胞表达miR-30a,通过降解GAB2 mRNA,引起血管内皮细胞自噬水平升高,导致动脉内皮损伤.