长链非编码RNA Neat1对紫外线B诱导人晶状体上皮细胞焦亡的抑制作用及其机制

目的:研究长链非编码RNA核旁斑长点组装转录本1(Neat1)在紫外线B诱导人晶状体上皮细胞(LECs)焦亡中的作用及其机制。方法:体外培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3，将处于对数生长期的HLE-B3细胞分别采用紫外线B照射0、2、4和8 h；采用Western blot法检测照射不同时长后焦亡相关蛋白胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达，采用实时荧光定量PCR法检测照射不同时长后细胞中Neat1 mRNA相对表达量，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力并以此筛选紫外线诱导LECs焦亡的最佳照射时长，最终确定为4 h。另将HLE-B3细胞分为阴性siRNA转染组、siRNA Neat1转染组、阴性siRNA转染+照射组和siRNA Neat1转染+照射组，采用相应试剂转染24 h，其中阴性siRNA转染+照射组和siRNA Neat1转染+照射组转染相应试剂后采用紫外线B照射4 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力，流式细胞术检测细胞焦亡，Western blot法检测caspase-1、gasdermin D蛋白(GSDMD)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)表达，ELISA法检测白细胞介素(IL)-1β质量浓度，透射电子显微镜下观察各组HLE-B3细胞超微结构变化。结果:随照射时间的延长，caspase-1蛋白表达条带灰度呈递增趋势。照射0、2、4、8 h caspase-1蛋白相对表达量分别为0.05±0.01、0.25±0.07、0.51±0.04和0.74±0.02，总体比较差异有统计学意义( F＝168.223， P<0.001)，其中照射不同时长两两比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Neat1 mRNA相对表达量随照射时间延长呈递增趋势，细胞活力值呈递减趋势，照射不同时长两两比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与阴性siRNA转染组比较，siRNA Neat1转染组细胞活力值升高，阴性siRNA转染+照射组细胞活力值降低，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；与阴性siRNA转染+照射组比较，siRNA Neat1转染+照射组细胞活力值升高，差异有统计学意义( P<0.05)。阴性siRNA转染组和siRNA Neat1转染+照射组细胞焦亡率明显低于阴性siRNA转染+照射组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。阴性siRNA转染+照射组caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量均较阴性siRNA转染组和siRNA Neat1转染+照射组高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。阴性siRNA转染+照射组IL-1β质量浓度明显高于阴性siRNA转染组和siRNA Neat1转染+照射组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。透射电子显微镜下观察可见，阴性siRNA转染+照射组和siRNA Neat1转染+照射组细胞肿胀，细胞膜孔隙形成，线粒体肿胀，呈空泡状，线粒体嵴模糊，其中与阴性siRNA转染+照射组相比，siRNA Neat1转染+照射组细胞肿胀程度减轻，细胞膜孔隙减少，线粒体肿胀程度亦减轻。 结论:Neat1通过caspase-1介导的焦亡经典途径参与紫外线B诱导的人LECs焦亡过程，沉默Neat1可以抑制人LECs焦亡。