蒸馏水处理对体外人晶状体上皮细胞活性的抑制作用

目的:研究蒸馏水处理对体外培养的人晶状体上皮细胞(LECs)活性的影响。方法:收集2020年5—12月在南京大学医学院附属鼓楼医院确诊为年龄相关性白内障并行超声乳化白内障吸除联合人工晶状体植入术的患者156例156眼，将手术过程中收集的晶状体前囊膜标本156片等分为312小片。采用计算机取随机数法将其中157小片样本分为正常对照组23小片、阳性对照组10小片、平衡盐溶液(BSS)浸泡组61小片和蒸馏水浸泡组63小片，其中正常对照组无任何处理；阳性对照组直接用质量分数4%组织细胞固定液固定；BSS浸泡组中20小片浸泡1 min、21小片浸泡2 min、20小片浸泡3 min；蒸馏水浸泡组中20小片浸泡1 min、23小片浸泡2 min、20小片浸泡3 min。另选取125小片模拟白内障手术过程中的注吸过程，按照上述BSS浸泡组和蒸馏水浸泡组处理相应时间后，用装有BSS的瓶子在70 cm高度冲洗1 min。采用锥虫蓝－伊红染色法检测细胞活力，计算LECs密度、死亡数、死亡率及脱落百分率。将剩余小片分为正常对照组、BSS浸泡组和蒸馏水浸泡1、2、3 min组，其中BSS浸泡组浸泡3 min，其余分组处理同前，光学显微镜和透射电子显微镜下观察各组LECs结构。结果:BSS浸泡各组LECs边界清晰，形态与正常对照组相比无明显差异。蒸馏水浸泡各组随时间延长，LECs逐渐胀大，死亡细胞边界不清。各组LECs密度、死亡数和死亡率总体比较差异均有统计学意义( F＝13.459、98.918、130.600，均 P<0.001)，其中蒸馏水浸泡2 min和3 min LECs密度均低于正常对照组，蒸馏水浸泡1、2、3 min组LECs死亡数和死亡率均高于正常对照组，蒸馏水浸泡1、2、3 min组LECs死亡数和死亡率均高于BSS浸泡相同时长组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。正常对照组，BSS浸泡1、2、3 min组和BSS浸泡联合冲洗组仅检测到少量LECs脱落。浸泡不同时间点，蒸馏水浸泡联合冲洗组LECs脱落明显，且随着蒸馏水浸泡时间的增加，LECs脱落范围增大。各组LECs脱落百分率总体比较差异有统计学意义( F＝123.670， P<0.001)，其中蒸馏水浸泡组、蒸馏水浸泡联合冲洗组处理不同时间LECs脱落百分率均高于正常对照组，蒸馏水浸泡组随处理时间延长LECs脱落百分率明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。光学显微镜下显示蒸馏水浸泡1、2、3 min组细胞破坏，其中浸泡2 min和3 min组LECs部分脱落。透射电子显微镜下可见蒸馏水浸泡1、2、3 min组细胞溶解破坏，亚细胞器肿胀，细胞间连接破坏；其中浸泡1 min和2 min组细胞与囊膜连接疏松，浸泡3 min组LECs与囊膜部分分离。 结论:蒸馏水浸泡可导致LECs死亡，其作用强度呈时间依赖性，蒸馏水浸泡联合冲洗可去除晶状体囊膜LECs。