微小RNA-30a-5p激活Wnt/β-连环蛋白信号通路对胃癌细胞增殖与侵袭的作用机制

目的 探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制.方法 体外培养胃癌MKN-45细胞;在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型,胃癌MKN-45细胞分为 3 组:miR-30a-5p 小干扰 RNA(miR-30a-5p inhibitor)组,miR-30a-5p 过表达 RNA 组和空白对照组(NC),荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物Cyclin D1(CCND1)基因的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮,分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC 组及 miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力,细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力.各组间比较采用t检验.结果 qPCR实验结果显示过表达miR-30a-5p能够显著抑制CCND1在mRNA的表达(0.58±0.05,t=11.39,P＜0.01),Western blot 实验结果显示,CCND1 蛋白水平,miR-30a-5p inhibitor组较 NC 组明显上升(284437±2 127 比 215 273±4097,t=25.95,P＜0.01),miR-30a-5p mimics 组较NC组明显下降(85 586±309比197 661±948,t=194.70,P＜0.01);双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中WNT信号通路活性较对照组显著降低(0.39±0.03,t=13.96,P＜0.01);CCK-8结果显示2 d后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p inhibitor 组[(93.09±4.18)％比(146.42±5.80)％,t=12.92,P＜0.01];miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(53.80±3.54)％比(100.00±2.18)％,t=19.25,P＜0.01].Transwell 结果显示 miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于 miR-30a-5p inhibitor 组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个,t=4.44,P＜0.05];miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于 miR-30a-5p Inhibitor NC 组[(19.33±6.66)个 比(45.00±4.58)个,t=5.50,P＜0.01].结论 miR-30a-5p 可以调控 Wnt/β-catenin 信号通路,过表达miR-30a-5p后可抑制Wnt/β-catenin信号通路降低胃癌细胞中Cyclin D1(CCND1)的表达,进一步影响胃癌的增殖与侵袭.