基于UPLC-MS对牛黄解毒片中胆酸类成分定量测定及化学模式识别研究

目的 建立超高效液相色谱串联四级杆-静电轨道阱高分辨质谱技术(UPLC-Q Exactive-Orbitrap MS/MS)同时测定牛黄解毒片(Niuhuang Jiedu Tablets,NJT)中牛磺胆酸、7-酮-3α,12-α-羟基胆烷酸、甘氨猪去氧胆酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-酮-7α,12α-二羟基-5β-胆烷酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、7-酮基胆石酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、12-酮脱氧胆酸、猪去氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺石胆酸钠、甘氨石胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸21种胆酸类成分含量的方法,并对不同批次的NJT进行质量评价.方法 采用Thermo Bremen Hypersil Gold色谱柱(100 mm×2.1mm,1.9 μm),以含0.1％甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.2mL/min,柱温为40℃;质谱采用加热型电喷雾离子源(HESI),在负离子平行反应监测模式下进行含量测定,采用SIGMA 14.0软件对定量结果进行化学计量学分析.结果 21种胆酸成分在线性范围内呈良好的线性关系(r2≥0.9989),其精密度、重复性、稳定性RSD均小于6.7％,平均回收率为 95.1％～102.5％(RSD≤4.5％),在正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)与层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)中,样品在95％置信区间内被分为3类,变量重要性排序值(variable importance in projection values,VIP)显示猪胆酸、牛磺胆酸、7-酮基胆石酸、甘氨胆酸、胆酸为样品间的主要差异成分.结论 所建立方法具有高效、灵敏的特点,能够快速实现对NJT中21种胆酸类成分的含量测定,可为其质量控制提供理论依据.