PU-H71对增加宫颈癌细胞辐射敏感性的研究

目的:探讨热休克蛋白90（Hsp90）抑制剂PU-H71联合X射线照射对辐射抗性人宫颈癌细胞的作用。方法:利用生物信息学分析 Hsp90基因在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达。通过分次照射法（2 Gy/次，共30次）获得辐射抗性的宫颈癌细胞系HeLa RR和SiHa RR，将细胞分为对照组（二甲基亚砜处理）、单纯照射组、PU-H71组（0.5 μmol/L PU-H71处理）、PU-H71+照射组（0.5 μmol/L PU-H71处理24 h后给予照射）。利用克隆形成法检测细胞存活。细胞处理后1、6、24 h，用免疫荧光法检测γH2AX聚焦点。细胞处理后1、2、6、12、24 h，利用蛋白质印迹法检测Rad51的表达；细胞处理后2 h，检测磷酸化的DNA依赖蛋白激酶催化亚基（p-DNA-PKcs）的蛋白质表达。细胞处理后48 h，流式细胞术检测细胞凋亡。 结果:PU-H71增强了辐射抗性宫颈癌细胞对X射线的敏感性。与单纯照射组相比，PU-H71+照射组HeLa RR和SiHa RR细胞，在10%存活下的辐射增敏比（SER）分别为1.36和1.27，而凋亡率分别提高了约72.1%和63.1%。PU-H71使辐射诱导的γH2AX聚焦点的持续时间延长，抑制了DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）的磷酸化，从而限制非同源末端连接（NHEJ）修复，同时延迟了同源重组修复。结论:PU-H71通过抑制DNA双链断裂修复途径，增加了辐射抗性宫颈癌细胞的辐射敏感性，有望作为一种增强宫颈癌放射治疗疗效的放射增敏剂。