抑制Caspase-1活化能减弱玉米赤霉烯酮诱导的猪小肠上皮细胞凋亡

为探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)毒性机制中细胞焦亡与凋亡间的关系,用不同质量浓度的ZEA(0、5、10、15 μg/mL)处理细胞24 h以及ZEA(15 μg/mL)与乙酰半胱氨酸(NAC,1 mmol/L)或Z-YVAD-FMK(10 μmol/L)联合作用24 h.采用CCK-8法检测存活率;微板法测定细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量水平;免疫印迹检测剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)蛋白水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和ELISA测定白细胞介素(IL)-18和IL-1β水平;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平和细胞凋亡率;免疫荧光检测Caspase-3表达水平.结果显示,ZEA引起IPEC-J2细胞存活率降低和LDH含量升高,呈剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01).与0 μg/mL组比较,ZEA处理后细胞中剪切的Caspase-1、IL-18和IL-1β水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.01).NAC孵育显著降低了 ZEA处理细胞的ROS水平、剪切的Caspase-1蛋白表达以及IL-18和IL-1β含量,较ZEA组差异显著(P＜0.01).与ZEA组相比,Z-YVAD-FMK+ZEA组细胞存活率明显升高(P＜0.01),而LDH含量、Caspase-3表达以及细胞凋亡水平则显著降低(P＜0.01).结果表明,活化的Caspase-1参与了 ZEA诱导的IPEC-J2细胞凋亡.