牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒及牛支原体三重Nano-PCR方法的建立与初步应用

为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒.使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化,建立了三重Nano-PCR检测方法.结果显示,三重Nano-PCR检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒(1μL)最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg,灵敏度分别为常规PCR的10、10、100倍.临床结果显示,30份采集于临床呼吸道病牛样品中,BVDV、IBRV和MB的Nano-PCR的检测阳性率分别为33.33％、36.67％、33.33％,而普通PCR的检测阳性率分别为26.67％、30％、20％,提示BVDV和IBRV混合感染最多,阳性率可达26.67％.三重Nano-PCR方法特异性良好,检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性.本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重Nano-PCR检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查.