基于猪丁型冠状病毒重组蛋白N间接ELISA检测方法的建立与初步应用

为建立快速、准确的猪丁型冠状病毒(PDCoV)抗体ELISA检测方法,本研究以重组蛋白N作为包被抗原,建立了 PDCoV间接ELISA抗体检测方法.结果显示,经条件筛选,确定了该ELISA最佳反应条件:重组蛋白每孔包被0.2 μg;待检血清1:80稀释,孵育60 min;酶标二抗1:4 000稀释,反应30 min;底物显色10min.待检血清样品S/P值＞0.200时判定为阳性,S/P值＜0.173时判定为阴性,S/P值介于0.173和0.200之间则判为可疑.特异性试验结果表明,该检测方法不与HCV、FMDV、PRRSV、PRV、TGEV和PEDV的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.79％～4.75％,批间变异系数在1.92％～6.60％之间,表明重复性良好;敏感性试验结果显示,该方法可检测到血清最大稀释度为1:320.符合率试验结果显示,本方法与中和试验检测结果符合度高,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为86.36％、96.43％和92.00％.利用本研究建立的ELISA方法对456份采自广西地区不同阶段猪群的血清样品进行检测,结果显示,总体样品阳性率为40.40％,不同阶段猪群抗体阳性率有较大区别,后备母猪的阳性率可高达100％,保育猪阳性率最低仅为3.90％.