miR-499基因家族进化分析及其对鸡骨骼肌肌纤维类型调控的研究

为了对miR-499进行序列进化分析、靶基因预测、鉴定和表达量分析,探究其对鸡骨骼肌肌纤维类型的具体调控作用,在miRBase数据库检索miR-499基因家族的序列,利用ClustalX软件对序列特征进行分析,采用MEGA7.0构建miR-499系统发育树,再利用生物信息学工具进行靶基因预测和功能富集,最后通过荧光定量PCR和双荧光素酶报告基因试验对miR-499及其靶基因SOX6在鸡快肌和慢肌的表达量和靶向结合关系进行检测.结果发现,在43种脊椎动物中查询到75条miR-499基因家族序列,主要位于MYH7B基因内含子区,且具有较高的保守性.进化分析表明,miR-499序列进化中符合物种进化演变的规律.靶基因功能富集发现,miR-499与组织发育和能量代谢等过程有关.荧光定量检测结果显示,miR-499在鸡慢肌中表达量显著高于快肌(P＜0.05),与SOX6的表达规律相反.双荧光素酶报告基因试验发现,SOX6的表达能够被miR-499-5p靶向抑制,提示miR-499可能通过SOX6基因参与肌纤维类型调控.