猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究

[目的]分析猪源戊型肝炎病毒(Swine hepatitis E virus,sHEV)4型ORF2蛋白的结构和功能,筛选具有保护性抗原的基因片段并表达蛋白,为研究其作为潜在保护性抗原提供候选蛋白.[方法]对sHEV 4型ORF2蛋白进行生物信息学分析,选取具有潜在保护性抗原蛋白的基因片段ORF2(128/140),通过PCR扩增、酶切后克隆至昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞,通过Western blotting鉴定分析表达蛋白p128/p140.[结果]生物信息学分析显示,sHEV 4型ORF2蛋白存在2个稳定蛋白:p128和p140,分别含有496和476个氨基酸,二者皆为稳定蛋白,无跨膜区,蛋白二级结构主要以无规则卷曲为主.p128蛋白有11个T细胞表位、21个B细胞表位;p140蛋白有14个T细胞表位、18个B细胞表位.成功构建ORF2(128)、ORF2(140)2个基因的昆虫细胞表达载体,转染sf9细胞后经Western blotting检测发现,表达蛋白可被His标签单抗、sHEV抗体阳性血清识别.[结论]试验发现2个sHEV具有潜在保护性抗原的p128和p140蛋白,均可在sf9细胞中表达,且具有免疫活性.结果 为进一步研究sHEV ORF2蛋白的功能和新型疫苗的研发提供了材料.