腺相关病毒载体血清型8递送的大鼠FVIII轻链对不同长度人FVIII重链活性的促进作用
Journal of Experimental Hematology(2022)
Abstract
目的:研究大鼠FVIII轻链(rLC)对不同长度人FVIII重链(hHC,包括hHC745和hHC1690)活性的影响.方法:将hHC745、hHC1690、人FVIII轻链(hLC)和rLC分别克隆至含CB启动子的腺相关病毒血清型8(AAV8)表达载体中,采用HC和LC共表达的双链策略,转染293T细胞,收取转染后48 h的细胞培养上清;质粒经尾静脉高压注入血友病A(HA)小鼠,注射后48 h通过眼眶采血收集小鼠的外周血血浆.应用活化部分凝血活酶时间(aPTT)法检测FVIII的活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测FVIII的抗原表达量,计算比活性.结果:在293T细胞中,hHC745和hHC1690与rLC共表达时的FVIII活性显著高于与hLC共表达时的活性,分别提高到约4.6倍和2.9倍;ELISA结果表明hHC745和hHC1690与hLC和rLC共表达时的FVIII抗原表达无统计学差异;根据aPTT测得的FVIII活性与ELISA测得的FVIII抗原表达量计算的比活性结果显示,hHC745与rLC共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的比活性的约4.1倍,而hHC1690与rLC共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的约2.8倍.在高压注射的HA小鼠中,hHC745和hHC1690与rLC共表达时的FVIII活性显著高于与hLC共表达时的活性,活性分别提高到约5.1倍和2.1倍;ELISA结果同样显示,hHC745和hHC1690与hLC和rLC共表达时FVIII抗原表达无统计学差异;比活性结果表明,hHC745和hHC1690与rLC共表达时的比活性较与hLC共表达时的比活性显著提高,分别提高到约4.2倍和1.8倍;hHC1690与rLC共表达时的FVIII活性显著高于hHC745与rLC共表达时的活性.结论:rLC可以显著提高不同长度hFVIII重链(hHC745和hHC1690)的活性.
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