四五护脉汤对同型半胱氨酸损伤后人脐静脉内皮细胞的保护机制探讨

目的 观察四五护脉汤对同型半胱氨酸(homocysteinemia,HCY)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的影响及机制.方法 将HUVEC常规培养传代后,MTT法检测细胞活力并确定药物的最佳实验浓度.将细胞分组,A组为正常HUVEC,B-F组加入125 μmol/L的HCY 100 μL制备细胞损伤模型,培养48 h后,C组加入31.25μmol/LNaHS100μL,D、E、F组分别加入 1.6、2.2、2.8 g/L 四五护脉汤 100 μL,继续培养48 hoMTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,硝酸还原酶法检测细胞培养液NO水平,Western blot法检测细胞磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K)、磷酸化AKT蛋白(p-AKT)抗体、小窝蛋白-1(Caveolin-l,CAV-1)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达,RT-PCR法检测细胞内eNOS mRNA表达,BCA测定细胞黏附率.结果 HCY、NaHS最佳实验浓度分别为125、31.25 μmoi/L,四五护脉汤干预浓度为1.6、2.2、2.8g/L.HCY干预后,HUVEC活力下降,凋亡率上升,迁移率下降,NO水平降低,eNOS、PI3K、p-AKT蛋白相对表达量降低,CAV-1蛋白相对表达量升高,eNOS mRNA相对表达量降低,单核细胞黏附率升高(P＜0.05);而四五护脉汤可逆转上述变化(P＜0.05),且呈浓度依赖性.结论 四五护脉汤能够通过调节PI3K-AKT-eNOS信号通路,提高NO表达,减少内皮细胞凋亡,提高内皮细胞活力、迁移,抑制单核细胞黏附,从而减少内皮细胞损伤,达到保护内皮细胞的目的.