基于CRISPR-Cas9介导敲除盘基网柄菌erkA基因的方法建立和erkA趋电性研究

以盘基网柄菌为研究对象,首先建立基于成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白 9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)基因编辑系统的erkA基因敲除方法,DNA测序和蛋白质印迹实验都证明所设计靶点都能有效地编辑erkA;随后对erkA突变株的趋电性进行探究,发现在 12 V/cm的直流电场中,erkA突变株仍维持着与野生型细胞接近的趋电性,仅在运动速度上表现出增加趋势.在盘基网柄菌中利用 CRISPR/Cas9 系统成功构建了基因突变株,也明确了在盘基网柄菌中erkA基因并不是细胞感应电场的关键基因.