荧光RAA检测小鼠微小病毒的研究和应用

目的 病毒培养、组织学、免疫学及普通PCR方法等在小鼠微小病毒(minute virus of mice,MVM)的检测方面都存在一定的不足,不能满足目前实验动物饲养机构现场检测MVM病毒的需要,因此探索开发一种新的、简单易用,便于现场检测MVM的检测方法具有重要的意义.方法 根据Genbank公布的MVM序列,对MVM高度保守序列区域Ns1基因设计荧光重组酶介导链替换核酸扩增的引物和探针,建立了一种MVM荧光法重组酶介导链替换核酸扩增技术(Real-time RAA)检测方法,对其特异性、室温储存稳定性、灵敏度及临床样本验证方面与qPCR法进行对比分析.结果 荧光RAA法在39℃20 min内即可检测到MVM病毒特异性扩增曲线;其灵敏度为10 copies/μL;与Reo-3、MHV-1、MHV-3、MHV-A59、MHV-JHM病毒均无交叉反应;检测试剂室温储存20 d无明显的扩增性能下降;分别对15份阳性模拟样品进行荧光RAA法与qPCR法的检测比对,结果显示两种方法的符合率为15/15;对两种方法的相关性进行统计学分析,结果显示相关系数R2=0.85,两种方法具有显著的线性相关性.结论 本研究建立的MVM荧光RAA法,操作简单,特异性强、灵敏度高,能够快速有效地检出临床样本.