蜱传脑炎病毒衣壳蛋白的可溶性表达、纯化及初步应用

目的 构建蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)衣壳蛋白(capsid protein,C)原核表达质粒,并以其表达、纯化的C蛋白作为抗原检测临床血清,评价其在蜱传脑炎(tick-borne encephalitis,TBE)临床血清学诊断中的应用.方法 登录Genbank对TBEV"森张"株C蛋白基因序列设计扩增引物,以PCR扩增C蛋白目的基因并克隆至原核表达载体pET-32a(+)后,构建重组表达质粒pET-32a-C.再将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,采用IPTG诱导剂诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性;以制备的C蛋白作为包被抗原,用间接ELISA分别检测20份TBEV IgG抗体阳性临床血清、10份流行性乙型脑炎病毒(Japa-nese encephalitis virus,JEV)阳性临床血清及20份阴性血清,并计算检测的特异性和敏感度.结果 重组表达质粒pET-32a-C序列测定正确;经12％SDS-PAGE电泳分析,重组C蛋白主要为可溶性蛋白表达;纯化后蛋白纯度＞90％,经Western blot鉴定可与TBEV全病毒血清抗体特异性结合.间接ELISA定性检测临床TBE血清,其特异性与敏感度分别为96.7％和95.0％.结论 成功构建了 TBEV衣壳蛋白重组表达质粒pET-32a-C并在大肠埃希菌中实现诱导表达;表达的重组C蛋白可与TBEV阳性血清特异性结合,在临床疾病的血清学诊断上具有一定的应用价值.