重组基因工程大肠杆菌制备1,3-二羟基丙酮

目的 探寻甘油发酵合成 1,3-二羟基丙酮(DHA)的高效工程菌.方法 以肺炎克雷伯菌基因组 DNA 为模板,运用 PCR 扩增到编码甘油脱氢酶(GDH)的基因(gldA),并克隆到大肠杆菌表达载体 pET28a 上,构建重组表达质粒pET-gldA;将其转入大肠杆菌 E.coli JM109,经筛选后获得了 DHA 重组基因工程菌.结果 该工程菌在含有甘油的培养基中发酵后的次级代谢产物经分离纯化,通过 1H 和 13C 核磁共振谱确定为目标产物 DHA,产量≥120 g/L.发酵液经过滤、有机溶剂萃取和结晶后,获得高质量 DHA.结论 该二菌株的基因能够高效重组,并获得甘油发酵合成DHA 的重组基因工程菌的成功表达.