云南栘(木衣)总DNA提取方法比较及SSR反应体系优化

[目的]从云南栘(木衣)叶片中提取高质量的总DNA,并建立稳定的SSR-PCR反应体系.[方法]以云南栘(木衣)幼嫩叶片为材料,采用尿素法、改良尿素法、SDS法、CTAB法、MAGEN试剂盒法和磁珠试剂盒法提取总DNA,从中筛选提取云南栘(木衣)总DNA的最佳方法;利用L16(45)的正交设计试验优化影响云南栘(木衣)SSR-PCR 扩增体系的影响因子,建立云南栘(木衣)SSR-PCR反应体系.[结果]改良尿素法为云南栘(木衣)总DNA的最佳提取方法,提取的总DNA质量浓度、总量和A260/A280分别为382.64ng/μL、38.26μg和1.87,且琼脂糖凝胶电泳的条带清晰明亮,说明DNA完整性好、质量浓度高.优化后的SSR-PCR扩增反应体系为:模板DNA 30ng,TaqDNA 聚合酶 0.5 U,引物 1.25 μmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,dNTPs 2.5 mmol/L,10×PCR buffer 2.5 μL,补水至25μL.[结论]改良尿素法能够从云南栘(木衣)中提取高质量的总DNA,所建立的SSR-PCR反应体系为云南栘(木衣)的遗传多样性分析和分子标记辅助育种等研究提供了技术支持.