2种核酸快提取法对羊口疮病毒和羊痘病毒DNA提取效能的比对研究

目的 合理选择病毒快速核酸提取方法.方法 分别采用2 种商品化核酸快提取法——Cell-to-cDNA裂解液(A法)和基于磁珠核酸提取方法(InnuPREP MP Basic Kit A,B法),提取羊临床样品中的羊口疮病毒(ORFV)和羊痘病毒(CaPV)核酸,使用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)和重组酶聚合酶扩增结合侧流层析技术(RPA-LFD)方法进行平行检测,并与常规核酸提取方法(宝生物病毒DNA/RNA提取试剂盒,C法)比较.结果 与C法相比,在A法和B法提取的46 份疑似orf拭子中,qPCR的ORFV核酸检出率分别为70.8％和87.5％,RPA-LFD的检出率分别为69.5％和82.6％;在A法和B法提取的52 份疑似CaP的拭子样品中,qPCR的CaPV核酸检出率分别为77％和90％,RPA-LFD的检出率分别为65.5％和89.7％.对组织样品分析发现:A法不能用于组织样品的核酸提取;在B法提取的52 份疑似orf组织样品核酸中,与C法相比,qPCR的ORFV核酸检出率为93.7％,RPA-LFD的检出率93.3％;对B法提取的61 份疑似CaP组织样品核酸中,qPCR的CaPV核酸检出率为94.5％,RPA-LFD的检出率为88.7％.结论 磁珠核酸提取方法(B法)可适用于不同样品中的ORFV和CaPV核酸的快速提取.