脂肪分化相关蛋白2对BCG诱导小鼠传代巨噬细胞自噬的调控作用

本研究旨在探讨脂肪分化相关蛋白2(perilipin 2,PLIN2)在卡介苗(bacillus calmette-guérin,BCG)感染的小鼠巨噬细胞RAW264.7中对自噬的调控作用.利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达,结合BCG感染,通过免疫印迹、流式细胞术和免疫荧光等技术,检测胞内PLIN2、自噬、内质网应激及脂肪酸代谢相关因子指标的表达变化.结果显示:BCG感染显著上调巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达(P＜0.05),极显著上调自噬相关蛋白ATG5(P＜0.01)、ATG12(P＜0.001)及LC3(P＜0.001)的表达,并伴随着细胞内中性脂质的蓄积.敲减PLIN2能使BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中自噬相关蛋白ATG5(P＜0.05)和ATG12(P＜0.05)显著下调以及LC3(P＜0.001)极显著下调,细胞自噬率极显著降低(P＜0.001),并极显著降低细胞内中性脂质的含量(P＜0.001).同时,敲减PLIN2显著下调CHOP(P＜0.05),并极显著下调ATF4(P＜0.001)内质网应激相关蛋白表达,细胞内Ca2+浓度极显著降低(P＜0.001).此外,利用内质网应激激动剂Tunicamycin持续激活内质网应激通路后,无论是否敲减PLIN2,BCG感染的巨噬细胞内自噬相关蛋白表达均无显著差异(P＞0.05).BCG感染巨噬细胞上调了 PLIN2的表达,而PLIN2通过上调细胞内脂肪酸含量,进而级联激活PERK-eIF2α-ATF4-CHOP内质网应激信号通路,诱导细胞自噬发生.