口蹄疫病毒O型阻断ELISA抗体检测方法的建立

利用口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus type O,FMDV-O)VP1 特异性蛋白为抗原,杂交瘤细胞 7E3分泌单克隆抗体,建立一种检测FMDV-O型的阻断酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法.对ELISA反应条件进行优化:抗原包被浓度为 48.4 g/mL,单抗稀释度为 28.0 g/mL,羊抗鼠酶标二抗(Sheep anti-mouse enzyme-conjugate secondary antibody,IgG-HRP)最佳稀释度为 1 g/mL,底物液反应时间为 37℃避光显色 15 min.ELISA结果的判定标准为:血清阴断率＜57％判为阳性,血清阻断率≥57％判为阴性.本研究建立的ELISA方法能与FMDV-O型阳性血清进行特异性反应,而与水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV),口蹄疫亚洲I型病毒(Foot and Mouth Disease virus type Asia1,FMDV-Asia1),羊痘病病毒(Sheep pox virus,QRF),口蹄疫A型病毒(Foot and mouth disease virus type A,FMDV-A),蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV),小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV),赤羽病病毒(Akabane virus,AKV)的阳性血清无交叉反应性.ELISA的重复性试验表明,批间和批内的变异系数均小于10％.比较试验结果表明,该ELISA的相对敏感性和特异性分别为88.9％和 100％,与金迈诗口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒的符合率为 93.75％.综上所述,本试验建立的口蹄疫病毒O型阻断ELISA抗体方法具有特异、稳定、灵敏的优点,为建立标准化的检测试剂盒奠定了基础.