九香虫药材及其混伪品的PCR鉴别

目的:建立一种能够准确鉴别九香虫及混伪品的特异性PCR方法,解决形态相似动物药材的鉴定问题.方法:收集不同产地九香虫及其常见混伪品8种123份,基于九香虫及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I(COI)序列差异,利用Clustal W软件进行同源比对并且筛选出特异性单核苷酸多态性(SNP)变异位点,根据变异位点设计特异性鉴别引物,采用3步法进行PCR扩增,并对影响PCR反应体系的反应条件进行考察,实测鉴定了九香虫及混伪品.结果:当模板量30～100 ng,退火温度为55℃,循环次数为35次时,九香虫能扩增出301 bp的单一明亮条带,而其混伪品均不具有此特异性条带.结论:使用特异性引物对九香虫及其混伪品进行验证的结果良好,与传统形态鉴定结果基本一致.因此,通过特异性PCR方法可以快速准确地鉴定正品九香虫.