沉默Tcf3对大鼠骨髓间充质干细胞伤口愈合作用的影响

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)在伤口愈合过程中的作用及其机制。方法:体外培养分离的BMSC，采用表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)诱导BMSC分化为促进伤口愈合的上皮样细胞，通过Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Tcf3、细胞角蛋白-18(CK-18)、CK-19、P63的蛋白和mRNA表达水平，通过CCK-8和克隆形成试验检测细胞活性，采用免疫组化染色和HE染色法评估Tcf3蛋白水平和皮肤修复程度，再利用靶向大鼠Tcf3基因的小干扰RNA(siRNA)来沉默Tcf3，并创建大鼠伤口愈合模型检测Tcf3对伤口愈合的影响。结果:Western blot和qRT-PCR检测结果显示：EGF和FGF可促进BMSC中CK-18、CK-19和P63的表达，降低Tcf3的表达( P<0.05)。免疫组织化学染色和HE染色结果显示：沉默BMSC中的Tcf3后，CK-18、CK-19和P63 mRNA和蛋白均高表达，增殖能力增强( P<0.05)。荧光素酶及Western blot结果显示，沉默BMSC中的Tcf3后，Wnt活性及β-连环蛋白(β-catenin)核表达增强，而添加XAV-393后，Wnt活性及β-catenin核表达随之下降( P<0.05)。与si-Tcf3组比较，在沉默Tcf3的基础上向BMSC培养基中添加XAV-393后，si-Tcf3+XAV-393组的克隆形成和细胞生长能力均有所下降( P<0.05)。双荧光素酶测定显示，沉默BMSC中的Tcf3后，Notch1通路的激活水平增加，但添加Notch1信号的抑制剂DAPT后，其活性和表达水平随之下降( P<0.05)。相比于si-Tcf3组，siRNA-Tcf3+DAPT组中CK-18、CK-19和P63的蛋白表达降低( P<0.05)。在大鼠创伤模型中，在受伤后第4、8天和12天(特别是第12天)时，皮肤中Tcf3蛋白和mRNA表达水平显著升高( P<0.05)。si-Tcf3 BMSC组的Tcf3表达水平低于正常BMSC组( P<0.05)。相比于正常BMSC组，si-Tcf3 BMSC组的伤口愈合效果更为显著：真皮更厚、毛囊更多且增殖空间更大。 结论:沉默Tcf3可增强BMSC在大鼠体内的伤口愈合作用，这将为加速皮肤再生提供新途径。