中华鳖dnd基因克隆及在生殖细胞中的表达

为了研究龟鳖类生殖细胞发育分化机制,实验通过RACE技术克隆获得了中华鳖dead end (dnd) 基因全长cDNA,RT-PCR分析了其在不同组织的转录表达情况,并通过原位杂交技术检测了dnd mRNA在中华鳖雌雄性腺配子发生过程中的表达变化.结果显示,中华鳖dnd cDNA全长1251 bp (GenBank登录号为OL757532),包括234 bp的3' 端非翻译区和1017 bp开放读码框,开放读码框编码338个氨基酸.氨基酸序列比对和系统进化树分析结果表明,中华鳖Dnd蛋白与其他物种同源蛋白一样,均具有6个保守的结构域,其中高度保守的RNA识别结构域是主要的功能结构域.中华鳖Dnd与绿海龟Dnd氨基酸序列一致性最高,亲缘关系最近.RT-PCR结果显示,Psdnd特异性地在中华鳖性腺组织中表达,且在卵巢中的表达明显高于精巢.原位杂交分析结果显示,Psdnd mRNA在生殖细胞中特异表达.在卵巢中,Psdnd mRNA主要在Ⅱ期初级卵母细胞的细胞质中表达,随着卵母细胞的增大,在Ⅳ期及以后的卵母细胞中检测不到其表达.在精巢中,Psdnd mRNA信号在初级精母细胞中表达最强,在次级精母细胞和精原细胞中表达水平次之,在精子细胞中未检测到信号.研究表明,dnd基因可能在调控中华鳖雌雄生殖细胞的发育中起重要作用.