黄鳝细胞质动力蛋白3基因的克隆及其在性逆转中的功能分析

为解析黄鳝(Monopterus albus)性逆转机制,实验以雌、雄、间性发育黄鳝为研究对象,分析不同组织、不同发育时期性腺、甲基睾丸酮处理性腺及Zebularine处理性腺原代细胞后dynlt3 基因表达模式的变化及其在性腺中的表达定位.性腺转录组测序结果显示,基因全长1082 bp,开放阅读框354 bp,编码117 个氨基酸.生物信息学分析显示,dynlt3 基因编码蛋白质的二级结构包含37.96％的α-螺旋,29.20％的β-折叠,32.85％的无规则卷曲.系统进化分析结果显示,黄鳝DYNLT3 氨基酸序列与硬骨鱼纲中底鳉(Fundulus heteroclitus)同源性最高.实时荧光定量PCR结果表明,dynlt3 基因在黄鳝肌肉和脑具有较高表达,心脏次之,在其它各组织表达量较低.在性腺的不同发育时期,在间性后期和雄性中表达量显著性高于雌性与间性早期.甲基睾酮处理后黄鳝卵巢组织结构发生明显退化,卵母细胞退化且数量减少,结缔组织间出现空泡结构;dynlt3 基因在卵巢中表达量显著性下调.原位杂交分析dynlt3 基因在性腺组织中的表达定位结果显示,在不同性腺发育时期均检测到dynlt3 阳性信号,间性性腺组织中dynlt3 基因主要在精原细胞和初级精母细胞中表达,精巢组织中dynlt3 基因可在精原细胞与初级精母细胞中,卵巢组织阳性信号较弱,主要在Ⅱ时相卵母细胞细胞质中表达.Zebularine处理性腺原代细胞后,dynlt3 基因表达无显著性差异.以上研究表明,dynlt3 参与黄鳝性腺发育过程,并在黄鳝性逆转及性腺细胞发育过程中发挥重要作用,但是甲基化可能不参与其基因表达调控.