甲型肝炎病毒衣壳蛋白VP1、VP3的原核表达及其免疫原性

目的 原核表达甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)衣壳蛋白VP1和VP3,并评价其免疫原性.方法 PCR法扩增VP1和VP3基因片段,克隆至载体pET-G28a中,构建重组表达质粒pET-G28a-VP1和pET-G28a-VP3,转化至感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,12％SDS-PAGE分析表达产物.目的蛋白经离子交换层析纯化,复性后与多种佐剂配伍,免疫雄性 BALB/c 小鼠,随机分为 VP1-MF59、VP1-AH、VP1-AP、VP1-AP-10CpG、VP1-AP-50CpG、VP3-AP、VP3-VP1-AP及PBS对照组,每组5只.ELISA法检测各组小鼠血清中IgG抗体效价,快速荧光灶免疫抑制试验测定VP1-AP、VP3-VP1-AP及PBS对照组小鼠血清中和抗体效价.结果 菌落PCR及测序结果证明,重组表达质粒pET-G28a-VP1及pET-G28a-VP3构建正确.重组蛋白VP1和VP3相对分子质量分别约为37 000和26 000,主要以包涵体形式存在,表达量分别为18.6％和32.4％,纯度分别为86.3％和84.7％,且分别可与兔抗HAV抗血清及鼠抗HAV-VP3抗血清发生特异性结合.VP1-AP-50CpG组小鼠血清的IgG抗体效价显著高于VP1-AP组(q=22.05,P＜0.01),VP3-VP1-AP组小鼠血清的IgG抗体效价显著高于VP1-AP及VP3-AP组(q分别为22.05和22.49,P均＜0.01).与PBS对照组比较,VP1-AP及VP3-VP1-AP组小鼠血清的中和抗体效价显著升高(q分别为7.79和25.11,P＜0.01).结论 原核表达的HAV衣壳蛋白VP1和VP3纯度较高,且具有良好的免疫原性,制剂中添加CpG有利于增强抗原的免疫原性.本研究为HAV重组亚单位疫苗的研发奠定了基础.