不同剂量胸腺肽-α1在肠毒素B与脂多糖复合诱导小鼠脓毒症模型中的免疫干预作用研究

目的 模拟革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌混合感染,建立金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)和脂多糖(LPS)复合诱导的小鼠脓毒症模型,观察血清炎症因子及组织蛋白表达水平的变化,探讨不同剂量胸腺肽-α1(Tα1)对脓毒症的免疫干预作用.方法 选择SPF级健康雄性BALb/c小鼠 90 只,按随机数字表法将小鼠分为对照组、Tα1 小剂量组和Tα1 大剂量组,每组 30 只.采用向小鼠腹腔注射 300 μg/kg SEB和1000 μg/kg LPS的方法复制小鼠复合感染脓毒症模型.于腹腔注射SEB2h后,给所有小鼠腹腔注射LPS 1000 μg/kg的同时Tα1 小剂量组小鼠腹部皮下注射Tα1100 μg/kg,Tα1 大剂量组小鼠腹部皮下注射Tα12000 μg/kg,对照组给予等量磷酸盐缓冲液(PBS).观察并记录各组小鼠制模后 6h的体征表现.于制模后2、4、6 h取血分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素(IL-6,IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;处死动物后留取脾脏组织,光镜下观察脾脏组织的病理学改变,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定脾脏组织核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达水平.结果 给药后 6 h,Tα1 小剂量组和Tα1 大剂量组小鼠精神活动、进食、寒战、呼吸、竖毛、大便等体征评分均较对照组明显降低[精神活动(分):1.20±0.42、1.10±0.31 比 2.70±0.48,进食(分):1.50±0.53、1.40±0.52比 2.60±0.70,寒战(分):1.20±0.42、1.30±0.48 比 2.30±0.48,呼吸(分):1.20±0.42、1.30±0.48 比 2.40±0.70,竖毛(分):1.40±0.52、1.20±0.42 比 2.60±0.52,大便(分):1.40±0.52、1.40±0.52 比 2.40±0.52,均P＜0.05].随时间延长,各组IL-6、IL-10 逐渐降低,IL-10/IL-6 比值呈先降低后升高的趋势,IFN-γ呈先升高后降低的趋势;对照组TNF-α持续降低,脾脏组织NF-κB p65 的蛋白表达水平持续升高;Tα1 小剂量组和Tα1 大剂量组TNF-α呈先降低后升高趋势,脾脏组织NF-κB p65 的蛋白表达水平呈先升高后降低趋势.给药后 2h,Tα1 小剂量组和Tα1 大剂量组IL-6、IFN-γ、NF-κB p65 的蛋白表达水平均明显高于对照组[IL-6(μg/L):2439.63±3.46、2442.38±22.53 比 2281.47±27.97,IFN-γ(μg/L):47.37±4.69、50.16±7.50 比 40.24±8.64,NF-κB p65/β-actin:0.160±0.009、0.155±0.009 比 0.108±0.005,均P＜0.05],IL-10、IL-10/IL-6 比值均明显低于对照组[IL-10(μg/L):82.30±17.00、70.89±8.25 比 214.71±110.43,IL-10/IL-6:0.034±0.007、0.029±0.003比 0.094±0.048,均P＜0.05];给药后 2h起Tα1 小剂量组和Tα1 大剂量组TNF-α较对照组明显降低(μg/L:774.84±136.97、1068.88±279.99 比 2712.68±718.06),持续到给药后 6h(均P＜0.05).病理学观察显示,肺组织光镜下可见对照组部分肺泡壁破坏、有肺间质出血现象,Tα1 小剂量组及Tα1 大剂量组可见肺间质血管充血扩张,未见肺间质出血;肝组织光镜下可见对照组肝细胞水肿,颜色变淡,Tα1 小剂量组及Tα1 大剂量组病变较轻;肾组织光镜下可见对照组肾间质血管充血,Tα1 小剂量组及Tα1 大剂量组病变较轻;心肌组织光镜下对照组偶见血管扩张充血,Tα1 小剂量组及Tα1 大剂量组形态学表现基本正常.结论 Tα1 有利于改善SEB与LPS复合介导的脓毒症小鼠预后,增强脓毒症小鼠的免疫应答,但持续时间有限,提示Tα1 在混合感染的研究中应关注使用时机和疗程;Tα1 在SEB与LPS复合介导的脓毒症小鼠中的有效剂量范围较大,合适的应用剂量有待进一步研究.