狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 为了解CAV2-ΔE3-CGS口服疫苗免疫后排毒情况和掌握犬腺病毒(CAV)感染本底情况,研究建立狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法.方法 针对CAV2-ΔE3-CGS中犬2型腺病毒E1基因和狂犬病病毒G基因设计特异性引物和探针,建立检测CAV2-ΔE3-CGS的双重荧光定量PCR检测方法,并对实验动物场和犬类留验场流浪犬口鼻拭子和环境样本进行了检测.结果 该方法生成的标准曲线分别为Y=-3.351×logX+44.895,R2为0.999和Y=-3.413×logX+45.192,R2为0.996,线性关系良好,最低检测线都为102拷贝/μL.在实验动物场流浪犬和环境中未检测到CAV2-ΔE3-CGS;在犬类留验场流浪犬中检测到CAV感染,其中口鼻拭子阳性率为5.88％(5/85),肛拭子阳性率为8.24％(7/85),环境样本阳性率为4.00％(1/25).结论 研究建立的双重荧光定量PCR检测方法适用于CAV2-ΔE3-CGS排毒情况排查和CAV感染调查.研究表明CAV2-ΔE3-CGS免疫后未检测到排毒,上海市流浪犬CAV感染率较低,因此符合CAV2-ΔE3-CGS的口服免疫要求.