热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜组织炎性反应及滑膜细胞坏死性凋亡的影响

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜组织炎性因子及滑膜细胞坏死性凋亡的影响,探讨热补针法治疗RA的抗炎机制.方法:新西兰家兔按随机数字表法分为正常组、模型组、抑制剂组、捻转补法组、热补针法组,每组8只.采用卵蛋白诱导联合弗氏完全佐剂混合液注射,配合低温冷冻法复制RA寒证模型.抑制剂组予TAK-632(25 mg/kg)灌胃,每2d治疗 1 次,共治疗7 次;捻转补法组和热补针法组取双侧"足三里"分别施以捻转补法及热补针法操作,均留针30 min,1次/d,共治疗14 次.干预结束后,测量各组家兔膝关节皮温、周径;彩色多普勒超声观察各组家兔膝关节腔积液、滑膜厚度及内部血流信号;HE染色法观察各组家兔膝关节滑膜组织病理形态学变化;ELISA 法检测各组家兔血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6 含量;透射电镜法观察各组家兔膝关节滑膜细胞超微结构及坏死情况;Western blot法检测各组家兔膝关节滑膜组织受体相互作用蛋白(RIPK)1、RIPK3、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化(p)-MLKL的表达.结果:与正常组比较,模型组家兔膝关节皮温明显降低(P＜0.01),周径明显增大(P＜0.01),彩色多普勒超声示滑膜弥漫性增生,关节腔积液及异常血流信号明显;H E染色示滑膜细胞明显增生,大量炎性细胞簇集,且排列紊乱;血清 T N F-α、IL-1β、IL-6 含量升高(P＜0.01);透射电镜示细胞膜完整性破坏,线粒体肿胀甚则破裂呈空泡样,细胞核破裂明显,染色质、核仁显著凝聚固缩;膝关节滑膜组织RIPK1、RIPK3、p-MLKL及MLKL蛋白表达显著升高(P＜0.01).与模型组比较,抑制剂组、捻转补法组、热补针法组膝关节皮温均升高,周径均缩小(P＜0.01,P＜0.05);滑膜组织增生、关节腔积液及异常血流信号不同程度减轻;滑膜细胞增生、炎性细胞浸润不同程度减轻;血清 T N F-α、IL-1β及IL-6 含量降低(P＜0.01,P＜0.05);细胞膜结构破坏及线粒体肿胀、破裂、核固缩不同程度减轻;滑膜组织RIPK1、RIPK3、p-MLKL及MLKL蛋白表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05).与捻转补法组比较,抑制剂组和热补针法组各指标变化更明显(P＜0.01,P＜0.05).结论:热补针法能减轻RA寒证家兔膝关节滑膜炎性反应,其机制可能与抑制滑膜细胞坏死性凋亡有关.