五虎汤通过调控miRNA-146a改善幼龄哮喘大鼠气道重塑

目的 探讨五虎汤通过调控miRNA-146a对幼龄哮喘大鼠气道重塑的影响.方法 SPF级幼龄雌性SD大鼠80只,先随机将20只作为空白组,60只作为造模组.造模组采用卵清白蛋白联合氢氧化铝五点注射法致敏以及卵清白蛋白雾化激发哮喘.两组各随机抽取10只检测气道反应性,评判造模是否成功.造模成功后,剩下的10只空白组大鼠作为正常组,50只造模组大鼠随机分为5组(模型组、五虎汤低剂量组、五虎汤中剂量组、五虎汤高剂量组、地塞米松组),每组10只.五虎汤高、中、低剂量组分别灌胃五虎汤4.428、2.214、1.107 g/kg,地塞米松组灌胃地塞米松0.075 mg/kg,正常组及模型组灌胃等容积生理盐水,1次/d,连续2周后处理大鼠.气道反应性检测大鼠气道阻力;HE、PAS及Masson染色法分别观察大鼠肺组织气道炎症细胞浸润、气道黏液储备和气道胶原沉积情况;Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1,TIMP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达水平;qPCR法检测miRNA-146a及MMP-9、TIMP-1 mRNA含量,并对miRNA-146a与MMP-9、TIMP-1 mRNA进行相关性分析.结果 与空白组比较,造模组气道阻力显著升高(P<0.01),提示造模成功.与正常组比较,模型组大鼠肺组织周围炎性细胞浸润,上皮细胞化生,炎性黏液较多,气道壁增厚,气道胶原广泛沉积;肺组织α-SMA、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均显著升高(P<0.01).与模型组相比,五虎汤高、中、低剂量组及地塞米松组气道阻力明显降低(P<0.01),肺组织病理情况明显缓解,且五虎汤高剂量组及地塞米松组改善更加明显;α-SMA、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均显著下降(P<0.01).五虎汤中、低剂量组α-SMA、TGF-β1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA及五虎汤低剂量组TIMP-1显著高于地塞米松组(P<0.05、P<0.01);五虎汤高、中剂量组α-SMA、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA及五虎汤高剂量组TGF-β1低于五虎汤低剂量组(P<0.05、P<0.01);五虎汤高剂量组α-SMA、TGF-β1、miRNA-146a、TIMP-1 mRNA低于五虎汤中剂量组(P<0.05、P<0.01).Pearson相关性分析显示,大鼠肺组织miRNA-146a与MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均有极强正相关性(r分别为0.956、0.973,P<0.01).结论 五虎汤能够有效改善哮喘大鼠气道重塑,这可能与五虎汤抑制miRNA-146a表达,降低MMP-9、TIMP-1及其mRNA,以及减少α-SMA、TGF-β1相关.