裸鼹鼠乳鼠心脏成纤维细胞的分离、培养及鉴定

目的 建立裸鼹鼠乳鼠心脏成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定方法.方法 选取出生1～3 d的裸鼹鼠乳鼠,在冰上分离出乳鼠心脏,用眼科剪将心脏剪成约1 mm×1 mm×1 mm小块,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶先后消化法分离心脏成纤维细胞.在光学显微镜下观察心脏成纤维细胞形态特征变化,CCK-8法检测细胞增殖活性,蛋白质印迹和免疫荧光法检测细胞波形蛋白表达情况.结果 酶消化法分离的心脏成纤维细胞原代培养4 h已经完全贴壁,36 h即可铺满整个35 mm培养皿.传代培养2～3 d时心脏成纤维细胞增殖活力最强,蛋白质印迹和免疫荧光均证实细胞表达波形蛋白.结论 胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶先后消化法分离裸鼹鼠乳鼠心脏成纤维细胞,可获得活力好且纯度高的心脏成纤维细胞.