S100A8/A9通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌的侵袭迁移

目的 研究外源性钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌(OSCC)细胞CAL-27和SCC-25迁移和侵袭能力.方法 分别或共同添加S100A8、S100A9蛋白培养CAL-27、SCC-25,蛋白印记法(Western blot)检测 β-catenin的表达情况;免疫荧光鉴定添加S100A8/A9蛋白培养CAL-27、SCC-2548 h后β-catenin的表达;加入20μg/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK-1),Western blot和实时定量荧光PCR(qPCR)检测β-catenin的表达;采用Transwell实验比较正常对照组(Control组)、添加S100A8/A9蛋白组、加入DKK-1组、加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组的细胞侵袭和迁移能力;Western blot实验检测细胞髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)和细胞周期蛋白D(cyclinD1)的表达.结果 S100A8、A9能激活Wnt/β-catenin通路,与S100A8和S100A9分别培养相比,共同培养时CAL-27和SCC-25细胞中的β-catenin表达随着时间上调,qPCR结果与Western blot结果一致;在免疫荧光实验中,SCC-25及CAL-27细胞的细胞质和细胞核内均观察到β-catenin表达量变化,SCC-25及CAL-27细胞内 β-catenin蛋白在48 h表达量增加(P<0.05);加入DKK-1,Western blot和qPCR显示 β-catenin的表达降低(P<0.001);添加S100A8/A9组细胞迁移和侵袭数多于Control组(P<0.001),添加DKK-1抑制剂组细胞侵袭迁移数量减少,加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组细胞侵袭迁移数量减少,提示DKK-1能够抑制外源性S100A8/A9蛋白对SCC-25及CAL-27细胞的侵袭迁移能力的促进作用,差异有统计学意义(P<0.001);加入Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1,Western blot实验显示Wnt/β-catenin通路关键分子c-Myc和cyclinD1的表达降低(P<0.001).结论 外源性S100A8/A9蛋白可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进SCC-25和CAL-27细胞的侵袭和迁移.