南方根结线虫MiPDCD6基因多克隆抗体的制备
Fujian Journal of Agricultural Sciences（2023）
Abstract
[目的]制备针对南方根结线虫食道腺蛋白MiPDCD6多克隆抗体,为进一步研究南方根结线虫MiPDCD6蛋白的致病机制提供技术支持和材料准备.[方法]将扩增MiPDCD6基因的功能片段,与原核表达质粒pET-32a(+)构建重组质粒pET-32a-MiPDCD6,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞进行诱导表达;将纯化的根结线虫MiPDCD6融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔,获得高效价高纯度的多克隆抗体.[结果]构建的重组质粒pET-32a-MiPDCD6转化大肠杆菌BL21细胞后,在诱导剂IPTG浓度1.0 mmol·L?-1、摇床温度37℃、转速150 r·min??1和振荡培养5 h条件下,成功表达MiPDCD6融合蛋白.ELISA和SDS-PAGE检测表明:将纯化的根结线虫MiPDCD6融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔,获得高效价高纯度的多克隆抗体,效价约为1:50000.[结论]明确了MiPDCD6基因原核表达条件;制备获得的根结线虫MiPDCD6蛋白的多克隆抗体效价和纯度较高,可用于后续研究MiPDCD6蛋白在南方根结线虫致病机理中发挥的功能.
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