人G1P[8]型轮状病毒HN15D2毒株的分离纯化及鉴定

目的:对轮状病毒(rotavirus, RV)阳性临床粪便标本进行毒株分离、纯化及鉴定。方法:将感染RV的腹泻患儿粪便标本在单层恒河猴肾细胞MA104上传代培养，分离毒株，通过噬斑法克隆纯化病毒，电子显微镜(电镜)观察病毒形态和大小；采用SDS-PAGE、免疫印迹法和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE)、反转录PCR及全基因组测序对病毒进行鉴定。结果:对大量临床标本进行传代筛选和噬斑纯化，得到1株RV野毒株。50%蔗糖超速离心纯化病毒在电镜下可见直径约75 nm的典型RV颗粒；SDS-PAGE和免疫印迹法结果显示在预期位置出现目的条带；IFA结果显示所分离病毒为RV; RNA-PAGE显示分离株电泳型为长型，电泳图谱中11个条带呈现4∶2∶3∶2排列；PCR扩增片段及全基因组测序结果表明分离毒株为G1P[8]型。结论:成功分离出1株人G1P[8]型RV野毒株，并命名为HN15D2。