沉默PGRN基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨沉默颗粒蛋白前体(PGRN)基因对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制.方法:按照脂质体法将siRNA PGRN、siRNA NC转染至RA滑膜成纤维细胞MH7A,记为siRNA NC组、siRNA PGRN组,对照组(Control)未进行转染处理;将siRNA PGRN转染RA滑膜成纤维细胞MH7A后,加入丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路激活剂Anisomycin,记为siRNA PGRN+Anisomycin组.采用qRT-PCR检测各组细胞PGRN mRNA表达水平;噻唑蓝(MTT)、克隆形成实验检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡变化;Western blot检测各组细胞PGRN、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、MAPK通路蛋白表达.结果:与Control组、siRNA NC组相比,siRNA PGRN组内PGRN mRNA及蛋白表达、克隆形成率、存活率明显降低,凋亡率明显升高,Cyclin D1、PCNA、Bcl-2、p-p38 MAPK蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加.与siRNA PGRN组相比,siRNA PGRN+An-isomycin组内p-p38 MAPK、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达增加,克隆形成率、存活率明显增加,Bax蛋白表达、凋亡率明显降低.结论:沉默PGRN能抑制RA滑膜成纤维细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与MAPK信号通路有关.