草地贪夜蛾取食诱导下玉米酵母双杂交文库的构建及ZmRop1互作蛋白筛选

[目的]构建以草地贪夜蛾取食诱导后的玉米酵母cDNA文库以及编码植物Rac蛋白的诱饵载体,并从文库中筛选ZmRop1的互作蛋白,为进一步从分子层面解析ZmRop1在玉米中的信号传导机制和提高玉米对草地贪夜蛾的抗性提供支持.[方法]以草地贪夜蛾取食后的玉米品种郑单958不同组织为材料提取总RNA,利用SMART技术反转录合成ds cDNA,连接pGADT7载体后转化到酵母Y187中构建玉米酵母双杂交cDNA文库;以玉米cDNA为模板克隆ZmRop1,构建诱饵载体pGBKT7-ZmRop1,经酶切及测序鉴定后转化到酵母AH109中,并鉴定诱饵蛋白毒性及自激活活性.通过酵母双杂交以ZmRop1为诱饵从cDNA文库筛选其潜在互作蛋白.[结果]研究获得的玉米cDNA文库库容量为4.08×106 CFU,文库滴度为1.3×108 CFU,文库片段多样性良好,文库重组率91.7％;诱饵载体pGBKT7-ZmRop1成功转入AH109且经过鉴定证明无毒性、无自激活活性;从文库中初步筛选到22个与ZmRop1互作的蛋白,分析表明参与调控植物防御等多种生物学活动.[结论]构建的酵母双杂交cDNA文库符合建库要求;构建的ZmRop1诱饵载体无毒性和自激活活性;筛选到22个与ZmRop1互作的靶标蛋白,为进一步研究ZmRop1参与调控植物防御的信号分子作用机制及后续筛选玉米抗虫基因打下了理论基础.