春兰叶斑病病原的鉴定和分析

[目的]明确野生春兰引种驯化过程中引发叶斑病的病原菌种类,为春兰叶斑病的诊断和防治提供科学依据.[方法]采集广东省广州市和贵州省遵义市典型春兰叶斑病的病叶,利用组织分离法对病原菌进行分离纯化;依据柯赫氏法则,通过刺伤接种和摩擦接种验证其致病性;根据病原菌形态学特征,结合ITS、ACT、CAL、EF-1a、GAPDH、GS和TUB2部分序列的多基因分子系统学分析等方法进行病原菌分类鉴定.[结果]从采集的3种不同类型症状的叶斑病病叶中共检测到4株致病菌,分别命名为GZH1、GZH2、GZH3和GZH4,其中GZH1和GZH4分离自广东广州采集的叶斑病病叶,GZH2和GZH3分离自贵州遵义采集的叶斑病病叶.致病性测定结果显示,菌株GZH1表现出较强的致病性,离体针刺接种发病明显;菌株GZH2、GZH3和GZH4离体针刺接种发病不明显,通过摩擦接种可在接种部位形成典型的坏死斑.菌株GZH1在PSA培养基上的菌落特征,大、小型分生孢子,小型分生孢子梗、厚垣孢子的形态及大小均符合尖镰孢(Fusarium oxysporum)的特征,其ITS和EF-1a部分序列与F.oxysporum菌株UACH-217相应序列的一致性分别达98.23％和97.24％,结合其多基因序列构建系统发育进化树分析,菌株GZH1被鉴定为尖镰孢(F.oxyspo-rum).菌株GZH2、GZH3和GZH4在PDA培养基上的菌落形态,分生孢子及其附着胞的形态和大小等,分别与兰花炭疽菌(Colletotrichum cymbidiicola)、果生炭疽菌(C.fructicola)和江西炭疽菌(C.jiangxiense)的特征相似;供试菌株GZH2的ITS、ACT、CAL、GAPDH和TUB2部分序列与C.cymbidiicola菌株CBS:123757对应序列的一致性分别达99.00％、100.00％、99.00％、99.00％、99.60％;供试菌株GZH3的ITS、ACT、CAL、GAPDH和TUB2部分序列与C.fructico-la菌株ICMP:18613对应序列的一致性分别达99.00％、99.00％、99.00％、100.00％、99.70％;供试菌株GZH4的ITS、ACT、CAL、GAPDH、TUB2和GS部分序列与C.jiangxiense菌株LF687的一致性分别达99.60％、99.00％、99.00％、99.00％、100.00％和97.10％;结合多基因序列构建系统发育进化树分析,菌株GZH2鉴定为兰花炭疽菌(C.cymbidiicola)、GZH3为果生炭疽菌(C.fructicola)、GZH4为江西炭疽菌(C.jiangxiense).[结论]不同地区春兰叶斑病的病原菌组成存在差异.尖镰孢(F.oxysporum)和江西炭疽菌(C.jiangxiense)是引起广东省广州地区春兰叶斑病的病原菌,兰花炭疽菌(C.cymbidiicola)和果生炭疽菌(C.fructicola)是引起贵州省遵义地区春兰叶斑病的病原菌.其中C.fructico-la和C.jiangxiense首次报道为害兰科植物,属于兰花新记录病害.